Existem certas vias metabólicas secundárias que podem ser estimuladas pela presença de CLARO ou ESCURO; aqui então, além do meio e do método de cultura, existem outros fatores que influenciam a produção de metabólitos secundários pela cultura de células.
A luz pode afetar positiva ou negativamente uma determinada cultura in vitro, de forma semelhante ao que acontece na natureza; este, portanto, estará presente ou ausente também em relação ao tipo de metabólito secundário a ser produzido.
A luz pode ser considerada um interruptor que nos permite ligar ou desligar vias metabólicas específicas. Deve ser avaliado não só em termos de presença ou ausência, mas também em termos de intensidade (quantidade de luz), qualidade (comprimentos de onda) e fotoperíodo (horas de luz e escuridão ao longo de 24 horas).
A aeração, que é a relação entre o oxigênio e o gás carbônico, pode estimular ou deprimir a produção de princípios ativos, por isso é bom saber se manter as células em anóxia afeta positivamente o objetivo final do biotecnologista.
A temperatura ótima de uma cultura in vitro oscila entre 25 e 30 ° C; no entanto, há exceções devidas.Em qualquer caso, uma variação térmica representa um estresse capaz de intervir de alguma forma na produção de metabólitos secundários.
Em uma cultura in vitro, o pH é frequentemente variável ao longo do tempo, porque as células se anabolizam e catabolizam continuamente; mas uma variação drástica dela pode mais uma vez influenciar a produção de princípios ativos; portanto, deve ser constantemente monitorado com um quimiostato.
A elicitação é um termo biotecnológico que indica o estímulo estressogênico determinado na cultura de duas formas: biótica ou abiótica. A elicitação, ou seja, a indução de um estresse, abiótico corresponde a um estresse físico, como irradiação UV ou "uso de metais pesados , enquanto a elicitação biótica corresponde a um estresse in vitro, que mimetiza a agressão dos fitopatógenos à planta na natureza (tomando cuidado para não adoecer a célula). Portanto, a produção de metabólitos secundários em resposta ao ataque do patógeno, a cultura é submetida à higienização em autoclave para destruir microorganismos indesejados.
Todos esses fatores, juntamente com o método de cultivo e as diferentes composições do meio de cultura, permitem que a própria cultura cresça adequadamente e produza seus metabólitos secundários. Cada espécie de planta cultivada in vitro requer a otimização personalizada de todos esses fatores, entre eles também a presença de hormônios no meio de cultura.Os hormônios mais utilizados na área biotecnológica são auxinas, giberelinas e citocinas; o etileno é pouco utilizado. O ácido abscísico é usado para induzir a geração de embriões somáticos.A presença ou ausência dessas classes hormonais, suas concentrações e suas proporções quantitativas, determinam o crescimento ao invés da produção de metabólitos secundários ou às vezes um certo grau de diferenciação, da cultura in vitro. A presença de classes hormonais é, portanto, essencial para orientar as células em direção ao objetivo estabelecido.
Antes de embarcar em um projeto biotecnológico, é essencial conhecer em profundidade todas as vias metabólicas que a cultura de células pode enfrentar; também porque essas vias são unidirecionais e vão do metabolismo primário ao secundário (nunca o contrário, razão pela qual os metabólitos primários são precursores dos secundários).
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